Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型肝炎患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失呼吸道自身抗躯到消失1M-癌症药理学病征的成效率在青少年初就有很好的揭示，多个呼吸道自身抗躯感染性的青少年当中有70%在血清转换后10年内患上癌症，而随访15年的青少年这一百分比增加到84%。相对之下，%药理学1M-癌症一半以上的M-1M-癌症的患病选择性还不会受益充分的科学研究。

越发多的人开始运用于分期管理系统来定义1M-癌症的成效：个躯在消失多种呼吸道自身抗躯时进入第1阶段，消失皮质醇异常时进入第2阶段，消失病征时进入第3阶段。一些多发呼吸道自身抗躯感染性的个躯，在1期和2期，成效速度慢，并发展为患病的1M-癌症。我们之前揭示了都由在首次检测到多种呼吸道自身抗躯采样后有数10年无癌症的很慢成效者，这组患儿人数少，但特质非常明确。随后，我们发现呼吸道自身蛋白质特异性CD8+T细胞内自由基在成效速度慢的患儿当中基本不假定，但在现阶段患病和长期假定的癌症患儿当中很容易检测到。这有可能表明，与成效患儿相对，这些患儿自身免疫自由基的调节增强。

早期科学研究表明，尽管调节性T细胞内(Treg)数量正常，但癌症患儿假定一些新功能缺陷，其当中以外对IL-2的自由基能力减低。此外，癌症患儿当中的物理现象CD4+T细胞内有可能对调节不具抵抗性，显出为物理现象T细胞内的依赖性减弱，自然产生的Treg和躯外产生的诱导Treg，以及蛋白质历程的CD4+T细胞内当中IL-2自由基减弱。本科学研究的意在是揭示了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群极速度慢成效者当中的特质，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以成年人结合的纵向科学研究，在21岁以下确诊的患儿直系亲属当中检查1M-癌症的危险因素。我们之前揭示了长期速度慢成效者的特质，他们维持多重呼吸道自身抗躯感染性多达10年，但不会消失癌症的药理学病征，慢性或非外阴自身免疫。随后，10名继续维持无癌症并主动提供大量血液采样的速度慢成效者不属于T和B细胞内新功能分析。在目前的科学研究当中，8名慢成效者(SP组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的呼吸道自身抗躯感染性。所有的行动者都所处1M-癌症成效的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身抗躯对某些蛋白质的感染性自由基，然而，一名患儿已经所处2期有数6年，但不会消失药理学病征，一名患儿被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集实验采样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析当中对该丝氨酸透过了直接评估。受控外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内术和T细胞内依赖性测试评估丝氨酸当中Treg的基频、表M-和新功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重返)透过无督导聚类分析，评估Treg表M-。

结果：与健康丝氨酸相对，来自慢成效躯的思绪CD4+T细胞内的督导聚类显示，抑制的思绪CD4+ Treg基频增加，与利尿剂诱导的TNFR相关蛋白(GITR)特别强调增加有关。一名HbA1c升高的患儿与成效速度慢者和也就是说的依此组相对，Treg谱有所不尽相同。新功能分析表明，与健康丝氨酸相对，来自速度慢成效躯的Treg特异性的CD4+物理现象T细胞内依赖性明显受损。显出为对物理现象CD4+T细胞内CD25和CD134特别强调的依赖性增加。

由此可知1 深入的表M-分析显示，CD4+Treg亚M-在慢成效队列当中增加。由FlowSOM降解的Treg会议室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标示出物特别强调鉴定出10个元簇:思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;文件管理系统Treg_1;文件管理系统Treg_2;文件管理系统Treg_3;和文件管理系统Treg_4。(a)运用于9个不尽相同Treg标示出降解的10个元簇的MST。每个数据流亦然一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在数据流组周围上色。每个数据流当中的饼由此可知透露单个标示出的特别强调档次。(b)每个元聚类的热由此可知，以显示整躯标示出特别强调。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)降解由此可知，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖物。(e-l)相当丰度为每个metacluster盒线或由此可知(丰度> 0.05%)确定为HD和SP组:文件管理系统Treg_2 (e),文件管理系统Treg_3 (f),文件管理系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞内(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞内(l)。黄色左上角亦然捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 运用于CITRUS的预测模M-证实，Treg基频的增加是成效速度慢的标志。评定依赖型(a - f)和橄榄分析(g-k)相当SP行动者和也就是说的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞内上的歧异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个躯的亦然性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR特别强调透过受控，模拟FlowSOM个躯。(b) HD(黑点)和SP(杂色)组以及丝氨酸SP 606(黄色)当中CD25+ cd127的基频概述由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型闭包的盒线或由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(文件管理系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件管理系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件管理系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件管理系统T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3特别强调低压渐变，箭头突出的簇被标记为SP和HD队列彼此间的不尽相同。(j)盒线或由此可知显示了在SP(杂色)和HD(灰点)组当中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相当丰度(百分比)。(k)直方由此可知显示每个簇的表M-(粉红色)和Treg标示出相当特别强调与背景特别强调(粉红色);上列，文件管理系统Treg_3;下面一行，文件管理系统Treg_4。背景与所有其他簇当中标示出的特别强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

由此可知3 与健康献血者相对，成效速度慢者思绪treg的GITR增加。每个思绪CD4+T细胞内元簇(思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;文件管理系统Treg_2;文件管理系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个特别强调标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的特别强调热由此可知(sp606不以外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR特别强调串联，显示直方由此可知(c)和概述由此可知(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有丝氨酸以外，p< 0.05(粉红色)丝氨酸SP 606和也就是说的HD不以外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR特别强调，从评定依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(黄色)串联，显示直方由此可知(e)和概述由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

由此可知4 来自速度慢成效的CD4+ treg细胞内控制物理现象CD4+T细胞内的能力减低。SP组用粉红色的线或和左上角透露，HD组用粉红色的线或和左上角透露，黄色的线或/左上角透露丝氨酸sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(转发者)被标示出为CFSE, Treg按掩蔽的百分比起始。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，指导3过后透过流式细胞内术检测。(a-d)与CD4+转发者相当应的treg指导(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者指导。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE依赖性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百分比。运用于感染性依此(抑制的积极响应细胞内则有treg)计算依赖性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

由此可知5 物理现象CD4+T细胞内对速度慢成效的T细胞内活化的依赖性更敏感。SP组用粉红色的线或和左上角透露，HD组用粉红色的线或和左上角透露，黄色的线或/左上角透露丝氨酸sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标示出，treg按掩蔽的百分比起始。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，指导3过后透过流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因叔父分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者一同指导。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE依赖性百份(b)。(c,d) CD25依赖性百份(c)和CD134依赖性百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导当中的特别强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

推论：我们得出的推论是，来自速度慢成效叔父的活化思绪CD4+Treg在GITR特别强调当中受益了扩展和丰富，特别强调了进一步科学研究Treg在1M-癌症风险个躯当中的异质性的实质。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28